实验室无菌技术入门：从洗手到移液的12个关键细节

1. 手部清洁规范：7步洗手法与消毒剂选择

洗手步骤：使用抗菌洗手液，按掌心→手背→指缝→指节→指尖→手腕的顺序揉搓至少40秒，流动水冲洗后无菌纸巾擦干。

消毒剂选择：推荐70%乙醇溶液喷洒手套表面（易燃环境改用异丙醇），避免含氯消毒剂残留影响细胞活性。

2. 手套穿戴与更换标准

材质选择：优先选用无粉丁腈手套（防化性能强）或乳胶手套（触感灵敏），避免PVC材质透气性差导致的汗液污染。

更换频率：每操作2小时或接触非洁净区物品后强制更换，破损时立即丢弃。

3. 工作台面消毒流程

预处理：移除非必要物品，清除可见污渍后喷洒70%乙醇，静置1分钟。

擦拭方向：单向S形路径擦拭，避免重复污染，重点处理移液器放置区与培养瓶接触区。

4. 生物安全柜预操作检查

开机程序：提前30分钟开启层流与紫外线灯，确认HEPA过滤器压差正常（≤50Pa报警阈值）。

物品摆放：按“洁净→半污染→污染”分区摆放，操作区保留30%空间保障气流循环。

5. 移液器防污染操作

吸头选择：使用预灭菌独立包装吸头，拆封时仅撕开尖端侧，避免手部接触内壁。

防气泡技巧：吸液时保持移液器垂直，排液时贴壁45°缓慢推出，避免液体飞溅。

6. 培养瓶开启与封口规范

瓶口灼烧争议：在Ⅱ级生物安全柜中无需火焰灼烧（气流保护），开放操作台需短暂灼烧瓶颈（<3秒）。

螺纹盖操作：旋开瓶盖后倒置于洁净区，避免内壁接触台面。

7. 液体转移禁忌与替代方案

禁止倾倒：液体灌注易产生气溶胶污染，需改用移液管定量转移。

气密连接：大规模培养时使用无菌导管接头（如Luer-Lock），减少开放操作。

8. 移液器灭菌与维护

高温灭菌：可拆卸移液器部件（如活塞）121℃高压蒸汽灭菌20分钟，校准后使用。

日常消毒：非灭菌移液器表面每日用75%乙醇擦拭，重点清洁刻度调节旋钮。

9. 意外污染应急处理

液体洒漏：立即用含0.5%过氧乙酸的无纺布覆盖10分钟，清理后二次消毒。

手套污染：脱除手套前用乙醇喷洒外层，内面朝外丢弃至生物危害垃圾桶。

10. 操作后清洁与废弃物管理

台面终处理：移出所有物品后，依次用清水→乙醇→无菌水擦拭，紫外线照射30分钟。

废弃物分类：锐器（如玻璃吸管）投入专用耐刺穿容器，生物废液需121℃灭菌40分钟。

11. 个人防护装备（PPE）穿戴要点

实验服选择：袖口、腰部需弹性收口设计，避免松散织物接触操作区。

口罩佩戴：在开放台操作时使用N95口罩，降低呼吸道微生物扩散风险。

12. 环境监测与记录

沉降菌检测：每周在操作区放置TSA琼脂平板（暴露30分钟），培养后菌落数应≤1 CFU/皿。

记录要求：详细登记消毒时间、试剂批号及异常事件，便于污染溯源。